Diferentes patrones de circulación dentro de los subgrupos A y B del virus sincitial respiratorio humano en algunas provincias de Cuba / Different patterns of circulation in subgroups A and B of human respiratory syncytial virus in some provinces of Cuba

Se realizó la secuenciación nucleotídica de la región del tercio C-terminal de la proteína G de 37 muestras de exudados nasofaríngeos, de niños menores de 1 año provenientes de algunas provincias de Cuba durante 5 períodos epidémicos (1995-2000), para conocer los patrones de circulación de cepas del virus sincitial respiratorio humano; el cual se clasifica en 2 subgrupos antigénicos A y B, y cada uno contiene múltiples variantes. El subgrupo A circuló durante todos los años, el subgrupo B se detectó solamente durante el año 2000. Dentro del subgrupo A se observó la presencia de cepas con 2 tamaños diferentes de la proteína G (297 aa y 298 aa), mientras que para el subgrupo B fue observado un único tamaño (295 aa). El análisis filogenético permitió identificar 5 y 2 genotipos dentro de los subgrupos A y B, respectivamente. Los virus de Cuba se relacionaron filogenéticamente con cepas de otras partes del mundo. Dentro del subgrupo A se encontraron 2 cepas, las cuales fueron muy similares a la cepa prototipo Long. Casi todas las cepas del año 2000 de ambos subgrupos, se agruparon filogenéticamente con cepas que circularon en Sudáfrica durante ese mismo período

Isolation and identification of Adenovirus in hospitalized children, under five years, with acute respiratory disease, in Havana, Cuba

Nine Adenovirus (Ad) strains isolated in Cuba, from 128 nasopharingeal swab specimens of children below five years old, with acute respiratory diseases, during 1996 and 1997, were studied by restriction enzyme analysis of genomic DNA with two endonucleases BamH I and Sma I. All different fragment patterns were compared with the respective prototypes. The identified adenoviruses were Ad 1 (n=4), Ad 2 (n=1) and Ad 6 (n=4). Males were more frequently infected than females. The analysis of the occurrence of these Adenovirus strains of subgenus C revealed that Ad 1 and Ad 6 were the predominant serotypes in 1996 and in 1997, respectively

Antigenic and Genetic Characterization of Twenty-six Strains of Human Respiratory Syncytial Virus (Subgroup A) Isolated During Three Consecutive Outbreaks in Havana City, Cuba

Twenty-six human respiratory syncytial virus strains (subgroup A) isolated from three outbreaks in Havana City during the period 1994/95, 1995/96 and 1996/97 were analyzed to determine their antigenic and genetic relationships. Analyses were performed by monoclonal antibodies and restriction mapping (N gene) following amplification of the select region of the virus genome by polymerase chain reaction. All isolated strains were classified as subgroup A by monoclonal antibodies and they showed a restriction pattern NP4 that belonged to subgroup A. Thus the results obtained in this work, showed a close relation (100 percent) between antigenic and genetic characterization of the isolated strains in our laboratory. These methods permit the examination of large numbers of isolates by molecular techniques, simplifying the researchs into the molecular epidemiology of the virus

Variabilidad antigénica de cepas de virus sincitial respiratorio aisladas en ciudad de la Habana mediante ELISA utilizando anticuerpos monoclonales / Antigenic variance of strains of the espiratory sincitial virus isolated in Habana city by eans of ELISA using antibodies

Se realizó el estudio de caracterización y análisis de la variabilidad antigénica con un panel de 10 anticuerpos monoclonales que reconocen a epítopes lineales de la protéina G, a 15 cepas de Virus Sincitial Respiratorio aisladas en dos brotes ocurridos en Ciudad Habana entre los meses de octubre a enero (1994-1995) y octubre (1996), respectivamente. Para ello se utilizaron dos cepas de referencia: la Cepa Long y la Cepa A/Mon/3/88. El ELISA fue el método empleado para los ensayos. Los resultados mostraron la variabilidad de la proteína G entre los aislamientos y su relación antigénica con la cepa prototipo Long, además de confirmar que todas las cepas que habían circulado en estos períodos correspondían antigénicamente al Subgrupo A

Incidencia de los Adenovirus en las conjuntivitisvirales / Incidence of Adenovirus on viral conjunctivitis

Se llevó a cabo un estudio de incidencia de los Adenovirus en las conjuntivitis virales, para lo cual se realizó un diseño muestraly se tomaron muestras de exudado conjuntival a 150 pacientes con diagnóstico deconjuntivitis de presuntiva causa viral, en el Hospital Oftalmológico "Ramón Pando Ferrer" en el período comprendido entre julio y diciembre de 1994. Las muestras fueron inoculadas en cultivo celular y a las que presentaron un efecto citopatogénico sugestivo de infección por Adenovirus, se les realizó la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Se usaron anticuerpos monoclonales contra Adenovirus, lo que permitió identificarlas como pertenecientes a la familia Adenoviridae. Se utilizó la técnica de hemaglutinación, con hematíes de monos y ratas como sistema indicador, para agrupar los aislamientos previamente identificados mediante la técnica de IFI, después se les realizó el análisis por enzimas de restricción del genoma viral, lo cual posibilitó la clasificación en tipos. Los resultados de este estudio mostraron una incidencia de los Adenovirus en las conjuntivitis virales de 20 por ciento con un intervalo de confianza del 14-26 por ciento y un índice de confiabilidad de 95 por ciento. Se demostró que el serotipo 37 fue el que produjo conjuntivitis con mayor frecuencia(AU)##o

Analysis of respiratory syncytial virus in clinical samples by reverse transcriptase-polymerase chain reaction restriction mapping

The aim of this study was to develop a polymerase chain reation (PCR) for detection of respiratory syncytial virus (RSV) genomes. The primers were designed from published sequences and selected from conserved regions of the genome encoding for the N protein of subgroups A and B of RSV. PCR was applied to 20 specimens from children admitted to the respirary ward of "William Soler" Pediatric Hospital in Havana City with a clinical diagnosis of bronchiolitis. The PCR was compared with viral isolation and with an indirect immunofluorescence technique that employs monoclonal antibodies of subgroups A and B. Of 20 nasopharyngeal exudates, 10 were found positive by the three assayed methods. In only two cases, samples that yielded positive RNA-PCR were found negative by indirect immunofluorescence and cell culture. Considering viral isolation as the "gold standard" technique, RNA-PCR had 100 per cent sensitivity and 80 per cent specificity. RNA-PCR is a specific and sensitive technique for the detection of the RSV genome. Technical advantages are discussed.

Evaluación de un conjugado anti-IgG de ratón-fluoresceína mediante técnicas de inmunofluorescencia indirecta y citometría de flujo / Evaluation of an anti-IgG conjugate of mouse-fluorescin by the indirect immunofluorescent techniques and flow citomerty

Se purificó una inmunoglobulina G de ratón a partir de suero por cromatografía de afinidad en proteína A. Con esta preparación se inmunizaron los conejos cuyos sueros fueron capaces de reconocer al antígeno inyectado mediante inmunodifusión doble. Los anticuerpos fueron precipitados del suero de conejo y purificados mediante cromatografía de intercambio iónico. Esta preparación fue conjugada a isotiocianato de fluorescencia según la tecnología convencional. El conjugado obtenido fue evaluado con las cepas de referencia de virus Parainfluenza 1, 2, 3; Adenovirus; virus sincitial respiratorio y virus influenza A y B por una técnica de inmunofluorescencia indirecta y muestras positivas de VIH mediante citometría de flujo. En ambos casos se utilizaron anticuerpos monoclonales específicos. Se evaluaron muestras clínicas de pacientes con infección respiratoria aguda

Aplicación de la reacción en cadena de la polimerasa para la identificación del virus sincitial respiratorio / Application of the polymerase chain reaction to identify the respiratory syncytial virus

Se desarrolló la reacción en cadena de la polimerasa (RCP) para la identificación del virus sincitial respiratorio (VSR) con el uso de la cepa de referencia. La alta sensibilidad y la especifidad obtenidas en nuestro trabajo demuestran la utilidad de la RCP para la detección del genoma del VSR y su aplicación en el diagnóstico

Normalización de un ensayo de ultramicroELISA para la detección de anticuerpos IgG al virus sincitial respiratorio

Se normalizó un ensayo de ultramicroELISA de doble anticuerpo para la detección de anticuerpos IgG al virus sincitial respiratorio (VSR), para ello se dispuso de un anticuerpo monoclonal antiproteína F del VSR, producido por el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de La Habana (CIGB). La utilización de este anticuerpo posibilitó la inclusión de preparaciones antigénicas crudas en lugar de fracciones purificadas, lo que disminuye notablemente la reactividad obtenida con el control de antígeno. Las condiciones del ensayo fueron determinadas mediante titulación cruzada y se obtuvo una sensibilidad de 97,2 %, un 91 % de coincidencia y una especificidad 83,3 % del UMELISA con respecto a la fijación del complemento. Los resultados pueden ser expresados cualitativamente o en títulos de anticuerpos empleando una sola dilución de suero (1:40) y una curva patrón.

An ultramicroELISA assay of double antibody for the detection of IgG antibodies to the respiratory syncytial virus (RSV) wasstandardized. It was used a RVS antiprotein F monoclonal antibody produced by the Genetic Engineering and Biotechnology Center (GEBC) in Havana. The use of this antibody allowed to include crude antigenic preparations instead of purified fractions, which caused a significant reduction of the reactivity obtained with the antigen control. The assay conditions were determined by crossed titration. It was obtained a sensitivity of 97.2 %, a coincidence of 91 %, and a specificity of 83.3 % of the UMELISA as regards the complement fixation. The results may be qualitatively expressed or by antibody titres using only one serum dillution (1:40) and a pattern curve.

Comparación de la línea NCI-H292 con otras líneas continuas para la multiplicación de virus respiratorios

La línea continua NCI-H292 de células mucoepidermoides de pulmón humano ha sido reportada ser de utilidad para la propagación de muchos virus, principalmente Adenovirus y Paramyxovirus. Se plantea la posible sustitución de cultivos primarios de riñón de mono por NCI-H292 para el aislamiento de dichos agentes. En el presente trabajo se evalúa la utilidad de esta nueva línea para la multiplicación de los virus sincitial respiratorio, Adenovirus 3 y 7 y los virus parainfluenza 1, 2 y 3 en comparación con las líneas celulares continuas utilizadas tradicionalmente para la propagación de éstos; para lo cual se inocularon cepas de los virus en cuestión en las líneas Vero, HEp-2 y HeLa, según sus sensibilidades conocidas, y en NCI-H292 paralelamente. La multiplicación viral se detectó por aparición de efecto citopático o por hemadsorción. Como resultado se corroboró la capacidad de multiplicación de la línea NCI-H292 para los Adenovirus 3 y 7 y el parainfluenza 3, siendo más útil para la multiplicación de éstos que las líneas tradicionalmente usadas.

The NCI-H292 continual line of mucoepidermoid cells of the human lungs has been reported to be useful for the propagation of many viruses, mainly Adenovirus and Paraxymovirus. It is stated the possible substitution of primary cultures of monkey kidney for NCI-H292 in order to isolate such agents. In the present paper it is evaluated the utility of this line for multiplying the respiratory syncytial viruses Adenovirus 3 and 7, and the parainfluenza viruses 1, 2, and 3, in comparison with the continual cellular lines traditionally used for the propagation of these viruses, whose strains were inoculated this time in the Vero, HEp-2, and HeLa lines, according to their know sensitivities as well as in NCI-H292 simultaneously. The viral multiplication was detected by the appareance of the cytopathic effect or by hemaadsorption. As a result, it was demostrated the multiplication capacity of the NCI-H292 line for Adenoviruses 3 and 7 and parainfluenza 3, being more useful for their multiplication than the tradicionally used lines.

Estimacion de titulos de anticuerpos IgG a Adenovirus utilizando una curva patron y un ensayo de ultramiocroELISA indirecto / Estimation of the titre of IgG antibodies to Adenovirus using a standard curve and an indirect ultramicroELISA assay

Se logro normalizar un procedimiento que combinaba un ensayo de ultramicroELISA indirecto con una curva patron y que permitio estimar el titulo de anticuerpos IgG a Adenovirus en muestras de suero humano utilizando una sola dilucion de estos. Basandose en el titulo a punto final previamente determinado para un panel de 117 muestras de suero, se seleccionaron 90 de estas (r2 = 0,98) para construir 4 curvas patrones que relacionaron el logaritmo natural de las respuestas de fluorescencia y el logaritmo natural del titulo a punto final para un rango amplio de diluciones del suero (1:40 hasta 1:320). Se selecciono la curva correspondiente a la dilucion 1:40 del suero (r2 = 0,81), la cual posibilito una optima utilizacion de los accesorios disenados para la manipulacion de los volumenes en el rango ultramicro y, por tanto, la automatizacion de todo el procedimiento. Los resultados obtenidos con respecto a la tecnica de fijacion del complemento (100 por ciento de sensibilidad y 97,3 por ciento de especificidad) respaldan la utilizacion de este metodo como una herramienta complementaria en la ejecucion de estudios seroepidemiologicos a gran escala y con fines diagnosticos

Clasificacion en subgrupos de cepas del virus sincitial respiratorio aisladas de un brote en Ciudad de La Habana / Classification into subgroups of respiratory sincytial virus strains isolated during an outbreak in Havana City

Se detecto un alto numero de casos de enfermedades repiratorias agudas en ninos menores de 1 ano, ingresados en un hospital de Ciudad de La Habana. De 93 pacientes estudiados se obtuvieron 25 cepas del virus sincitial respiratorio. Los aislamientos virales fueron multiplicados en celulas HEP-2, y despues de observarse un efecto citopatico del 80 por ciento se clasificaron en subgrupos por la tecnica de immunofluorescencia indirecta del subgrupo A. Este tipo de estudio es el primero realizado en nuestro pais, lo cual nos permitio profundizar en la causa viral de estas enfermedades y conocer que durante el brote circulo el subgru-po A del virus sincitial respiratorio

Estudio serológico para determinar la circulación de virus respiratorios en Ciudad de La Habana / Serological study for determining the circulation of respiratory viruses in Havana City

Se investigaron durante 1991, 2 400 monosueros de individuos menores de 15 años y 2 400 de personas de igual edad o mayor a los 15 años, contra antígenos de 7 virus respiratorios, por las técnicas de fijación de complemento e inhibición de la hemaglutinación. Los resultados de estas investigaciones sirvieron para determinar la poca circulación del virus sincitial respiratorio, lo que puede dar lugar a la acumulación de una población suceptible y la ocurrencia de brotes. Se determinó el estado endémico de los Adenovirus y que el subtipo H1N1 de influenza A circuló poco, con un alza en la población menor de 1 año en el mes de noviembre. El subtipo H3N2 de influenza A fue el agente más importante dentro de la población investigada, seguido de Influenza B durante los meses de septiembre a noviembre. Todos los agentes virales investigados circularon en los diversos grupos de edades de la población estudiada

Estudio serológico en una población infantil con antígenos de gripe humana y animal / Serologic study in an infantile population with antigens of human and animal influenza

Se realizó un estudio serológico con 600 monosueros de niños entre 0 y 14 años por la técnica de inhibición de la hemeglutinación con sueros procedentes del Hospital Pediátrico Docente de Centro Habana. Este estudio abarcó desde octubre de 1982 hasta marzo de 1983. Se utilizaron 20 antígenos de virus de gripe tipo A de variadas fórmulas antigénicas de origen humano y animal. Los tantos por cientos más altos de sueros positivos se correspondieron con los de fórmula antigénica H3N2 y los más bajos con los de fórmula antigénica H1N1. No se encontró positividad al resto de los subtipos de origen humano ni animal

Primer informe de aislamiento del virus de la gripe A en aves silvestres en Cuba / First report about isolation of influenza A virus from wild birds in Cuba

Se cazan 100 aves silvestres autóctonas y migratorias en la provincia de Matanzas, Municipio Ciénaga de Zapata. Se obtienen 9 aislamientos para el 9% de positividad. Se informa que de los aislamientos obtenidos, ocho se correspondieron con la fórmula antigénica H3N8, los cuales fueron recombinantes del Complejo Hong Kong; 1 se corresponde con la fórmula antigénica H7N7 similar a la cepa A/Equina/Praga/1/56 (H7Ny) por su neuroaminidasa, y por su hemaglutinina a la cepa A/FPV/Rostock/34 (H7N1)